大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽

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     动物血清：内皮细胞血清、GIBCO胎牛清、HyClone。动物血清：内皮细胞血清、GIBCO胎牛清、HyClone。
     细胞：*细胞、正常细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞。细胞：*细胞、正常细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞。
大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
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