普马拉病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

产品特点：
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

订购信息：
 产品名称：普马拉病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）
规格：50T
编号：BH-P96482
分类：荧光PCR法
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。

准备物品：
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀释液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
产品说明书                                   1份
使用及效果：
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
正常大鼠肾细胞;NRK硫代腺嘌呤二核苷酸1酸钠盐Thionicotinamide adenine dinucleotidephosphate  salt美国进口

Panc 10.05细胞，胰腺腺癌细胞 舌鳞癌细胞系,TSCCA细胞 大鼠脑胶质瘤细胞;C6腺嘌呤二核苷1酸钠盐Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate  salt美国进口

JeKo-1(套细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2腺嘌呤二核苷酸钠盐Nicotinic acid adenine dinucleotide  salt美国进口

Promocell C-25020 Hepatocyte Maienance Medium, 肝细胞维持培养液 500mlα-腺嘌呤二核苷酸α-Nicotinamide adenine dinucleotide美国进口

胃腺癌细胞;SGC-7901 [SGC7901]NAD+, 锂盐NAD+, Lithium Salt美国进口
HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 细胞裂解液 (阳性对照) 苯甲酰基十字孢碱(PKC-412)≥96%,美国进口Midostaurin

A431 表皮癌细胞无水邻菲啰啉；1,10-菲罗啉AR,>99%1,10 –Phenanthroline anhydrous

PLC/PRF/5肝癌亚力山大细胞 PLC/PRF/5 human hepatoma cell Alexander MEM培养基(GIBCO)+10%FBS邻菲啰啉一水；1,10-菲罗啉一水AR,>99%1,10-Phenanthroline hydrate

RSPO3 Protein Human 重组 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 标签)邻菲啰啉盐酸盐一水；1,10-菲罗啉盐酸盐AR,>99%1,10-Phenanthroline   monohydrate

骨骼肌细胞 (HSkMC)( 5×105 ) mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞 Mouse酮色林,凯他色林()HPLC>98%,Ketanserin
普马拉病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）RLF, 大鼠成纤维细胞 STJ.EPI.H7细胞 COS-1(SV40 转化的非洲绿猴肾细胞)S-(+)-2-基-4-甲基-1-，英文名或英文缩写：L-Leucinol，级别：BR，98%，规格：5克

结直肠腺癌细胞;HCT 116 [HCT116]3，5-二基异坐，97% 3,5-Dimqthylisoxczolq 300-87-8

REG1A Others Human  REG1A / PSPS 细胞裂解液 (阳性对照) PHOSPHATEBUFFEREDSALINE(PBS)20XCONCENTRATE,pH7.5PBS溶液超级透明无混浊液体RTsigma

脑微血管内皮细胞总RNAHBMEC NA脲酶，英文名或英文缩写：Urease(jack bean)，级别：BR，RZ～3,≥250u/mg，规格：25克

KYNU Others Mouse 小鼠 KYNU / Kynureninase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) -基本酚2-Aminopxenol