A431(A-431)人表皮癌细胞

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

细胞

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结

晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀用 6ml 培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

收到细胞后如何操作:

1、首先，观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请及时与我司技术支持联系。

2、用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于细胞培养箱内静置培养，隔天再取出进行观察。

3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

4、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中，备用；细胞传代时，可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。

5、确认细胞状态良好后，应及时将细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失。

6、建议客户收到细胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5张细胞照片，记录细胞状态，便于和我们技术支持沟通交流。

细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

    a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。        

     c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

     b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。  

公司正在出售的产品：

Leupaxin： 桩蛋白抗体 小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3

B16-F10(小鼠皮肤黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 人小神经胶质细胞HM 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(AIL-R1)ELISA 试剂盒 Biotin/HRP 辣根过氧化物酶标记 0.1ml

LRPAP1： 脂蛋白受体相关蛋白/低密度脂蛋白相关蛋白的相关蛋白1抗体 CL-0065CoC1/DDP(人卵巢耐药细胞亚株)5×106cells/瓶×2

FGF17 Protein Human 重组人 FGF17 蛋白 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(AIL)ELISA试剂盒 Bovine IgG (亲和化) IgG 10mg

LEPREL2： 皮屑样蛋白2抗体 ALDH4A1 Others Human 人 ALDH4A1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

HPV33 E6： 人类状瘤病毒33 E6蛋白抗体 人正常肺上皮细胞;BEAS-2B

COS-7(非洲绿猴SV40转化的肾细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0182P815(小鼠肥大细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2 正常大鼠肾细胞;NRK 人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA 试剂盒 Immunoglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1 免疫球蛋白结合蛋白-1 0.5mg

HEXB chain A： Beta基己糖苷酶beta亚基蛋白A链抗体 EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0902

PA-1(人卵巢腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA 试剂盒 CD133 造血干细胞抗原CD133 0.5mg

phospho-HSP70 (Tyr611)： 0酸化热休克蛋白-70抗体 PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

A431(A-431)人表皮癌细胞人皮肤黑色素瘤细胞;SK-MEL-1 大鼠解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)ELISA试剂盒 SAA(Mouse Serum amyloid A) 小鼠血清淀粉样蛋白A 96T

SCA14： 蛋白激酶C亚型G抗体 家猫肾细胞;CATK1

人绒毛间叶成纤维细胞(HVT)( 5×105 ) MCF-7(MCF7)(ATCC来源), 人癌细胞 Human 大鼠睫状神经营养因子(CF)ELISA试剂盒 ACA(Mouse anti-centrol and centrosome antibody) 小鼠抗中性粒/中心体抗体 人心肌细胞-总RNAHCM-a NA

CD70 Protein Rat 重组大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 标签) 大鼠睫状神经营养因子(CF)ELISA 试剂盒 6-K-PG  大鼠6酮前列腺素 96T

Phospho-PKC gamma (Thr674)： 0酸化蛋白激酶C亚型G抗体 HDAC8 Others Human 人 HDAC8 / HDACL1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

三、培养注意事项 

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。