Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）ELISA Kit

操作流程：
稀释——加样——温育——配液——洗涤——加酶——温育——洗涤——显色——终止——测定
1.有质量问题免费包换，合同上注明了的（质量问题包括运输不当，客户在使用过程中测不出结果，等等！）
2.全程技术指导.（包括售前的标本收集，使用过程中不明白的地方，实验结束后的数据分析，有任何疑问，我们技术都会即时给你去电）
3.提供免费代测的服务。（你只需把标本寄过来，我们为你节省时间，帮你出结果，原始数据，分析数据均可提供，一般时间是5天左右）
4.客户有任何问题，我们都是在一个工作日之内给出解决方案。售后和技术这一块都是竭诚为客户服务！
为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡、如何振荡。
振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标96孔微孔板振荡器。
孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体分子间的相互碰撞接触，使得反应过程更加*，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高；洗涤过程振荡，可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度，具体操作请参见说明书。

试剂和器材：
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等

试剂盒组成及试剂配制 ：
1.酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 
2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶
4. 标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事项：
1加样：
①实验样本过多时，可分批次操作，以减少实验时间延长造成的误差；
②加酶试剂后，用吸水纸吸干孔外试剂；
③作定量试验时，使用加样器加注试剂，并经常校正其准确性，此外，要做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。
2.温育：
①如有两种温度，尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件；
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察；
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”，因此尽量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅，若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出；
③为了洗涤效果好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次，或适当增加洗板的次数；
4.显色：
ELISA试剂盒中，如以四甲基联苯胺(TMB)为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以邻苯二胺(OPD)为底物，则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂，要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光，但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定：
读取结果要在15-30 min内完成，定性测定用肉眼判读试验结果时，反应板应水平距离白色背景10-15 cm；定量测定时用酶标仪读取结果，酶标仪不应置于阳光或强光照射下，需先预热15-30 min再进行测试。
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