ATCC15834 感受态细胞100ul*100

ATCC15834 感受态细胞100ul*100以下是的订购信息储存条件：-70℃冻存
操作方法:
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，*次使用前做预实验确定所加质粒的量），用手管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
ATCC15834 感受态细胞100ul*1003. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
ATCC15834 感受态细胞100ul*1002. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. *浓度不应高于25 μg/ml，过高的*浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入*的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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 VLA 人迟现抗原 规格： 48T/96T

ATCC15834 感受态细胞100ul*100 VLA 人迟现抗原 规格： 48T/96T

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4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时（160-220 转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
 C58C1 电感受态细胞50ul*105 将离心管内容物混匀，吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16 小时。
●  涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA 总量较少，可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）
 注意事项
1. 感受态细胞应保存在 -70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到低。
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