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ATCC15834 感受态细胞100ul*100

产品时间:2021-12-28

简要描述:

ATCC15834 感受态细胞100ul*100菌株一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的b-半乳糖苷酶氨基端实现a互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1 的突变有利于克隆DNA 的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

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ATCC15834 感受态细胞100ul*100以下是的订购信息储存条件:-70℃冻存
操作方法:
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,*次使用前做预实验确定所加质粒的量),用手管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
ATCC15834 感受态细胞100ul*1003. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
ATCC15834 感受态细胞100ul*1002. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。
4. *浓度不应高于25 μg/ml,过高的*浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入*的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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 MCP-4/CCL13 人单核细胞趋化蛋白4 规格: 48T/96T

 MCP-3/CCL7 人单核细胞趋化蛋白3 规格: 48T/96T

 MCP-2/CCL8 人单核细胞趋化蛋白2 规格: 48T/96T

 HSV-Ag2 人单纯疱疹病毒抗原2 规格: 48T/96T

 HSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格: 48T/96T

 HSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格: 48T/96T

 HSVⅡ-Ab 人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体 规格: 48T/96T

 MAO 人单胺氧化酶 规格: 48T/96T

 Big ET 人大内皮素 规格: 48T/96T

 Big ET 人大内皮素 规格: 48T/96T

 colicin 人大肠菌素 规格: 48T/96T

 CCSA-4 人大肠癌专一抗原4 规格: 48T/96T

 CCSA-3 人大肠癌专一抗原3 规格: 48T/96T

 CCSA-2 人大肠癌专一抗原2 规格: 48T/96T

 PRL 人催乳素 规格: 48T/96T

 MF/MPF 人促有丝分裂因子 规格: 48T/96T

 GnRH 人*释放激素 规格: 48T/96T

 DSIP 人促睡眠肽 规格: 48T/96T

 GHRH 人促生长激素释放激素 规格: 48T/96T

 ACTH 人促肾上腺皮质激素 规格: 48T/96T

 CRH 人促肾上皮质激素释放激素 规格: 48T/96T

 FSH 人促卵泡素 规格: 48T/96T

 TRH 人促甲状腺素释放激素 规格: 48T/96T

 TSH 人促甲状腺素 规格: 48T/96T

 TSHR 人促甲状腺激素受体抗体 规格: 48T/96T

 LH * 规格: 48T/96T

人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 规格: 48T/96T

 E3 人雌三醇 规格: 48T/96T

 E 人雌激素 规格: 48T/96T

 ER 人雌二醇受体 规格: 48T/96T

 E2 人雌二醇 规格: 48T/96T

 PACAP 人垂体腺苷酸环化酶激活肽 规格: 48T/96T

 VMA 人垂草扁桃酸 规格: 48T/96T

 PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 规格: 48T/96T

 PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 规格: 48T/96T

 VLA 人迟现抗原 规格: 48T/96T

ATCC15834 感受态细胞100ul*100 VLA 人迟现抗原 规格: 48T/96T

 MPF 人成熟促进因子 规格: 48T/96T

 OGP 人成骨生长肽 规格: 48T/96T

 SOD 人超氧化物歧化酶 规格: 48T/96T

 hs-CRP 人超敏C反应蛋白 规格: 48T/96T

4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时(160-220 转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
 C58C1 电感受态细胞50ul*105 将离心管内容物混匀,吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16 小时。
●  涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA 总量较少,可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
 注意事项
1. 感受态细胞应保存在 -70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到低。
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 C58C1 电感受态细胞50ul*10

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