3D4/21猪肺泡巨噬细胞

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结

晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀用 6ml 培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

收到细胞后如何操作:

1、首先，观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请及时与我司技术支持联系。

2、用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于细胞培养箱内静置培养，隔天再取出进行观察。

3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

4、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中，备用；细胞传代时，可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。

5、确认细胞状态良好后，应及时将细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失。

6、建议客户收到细胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5张细胞照片，记录细胞状态，便于和我们技术支持沟通交流。

细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

    a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。        

     c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

     b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。  

三、培养注意事项 

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。

公司正在出售的产品：

NeuroD1： 神经细胞分化因子1抗体 RELT Others Human 人 RELT / TNFRSF19L 人细胞裂解液 (阳性对照)

非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B 大鼠尿苷二0酸葡萄糖酸转移酶2(UGT2)ELISA试剂盒 E(Mouse estrogen)  小鼠雌激素 96T

NFAT2： 活化T细胞核因子1蛋白抗体 叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21

人毛发基质细胞(HHZMC)( 5×105 ) mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞 Mouse 大鼠尿苷二0酸葡萄糖酸转移酶2(UGT2) ELISA试剂盒 Ang- I  大鼠血管紧张素Ⅰ 96T

NMDAR1： 谷酸受体1抗体 小鼠骨髓瘤细胞;P3/NSI/1-Ag4-1

KDM1： 组蛋白赖酸特异性脱甲基酶1抗体 C2C12, 小鼠肌原细胞

EFNB1 Protein Mouse 重组小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签) 牛检测(e)ELISA 试剂盒 Agrin peptide 聚集蛋白抗原 0.5mg

KIF11： 驱动蛋白样蛋白1抗体 ENPEP Others Rat 大鼠 ENPEP / Aminopeptidase A (aa 41-945) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

人脑动脉血管内皮细胞培养基 100mL 牛呼肠孤病毒B-19株(RV-B19)ELISA试剂盒 ATP citrate lyase/ACLY 三0酸腺柠檬酸裂解酶 0.5mg

KMT3B： 组蛋白甲基化KMT3B抗体 RSC, 大鼠雪旺细胞 NCYC 234[IPAZSC 148]细胞 COS-7(SV40 转化的非洲绿猴肾细胞)

3D4/21猪肺泡巨噬细胞Semaphorin 3D： 跨膜蛋白SEMA3D抗体 牛肾细胞;MDBK(NBL-1)

CM-R059大鼠膀胱平滑肌细胞培养基100mL 大鼠S100钙结合蛋白A8(S100A8)ELISA试剂盒 NHE3(Human Na+/H+ exchanger 3)  人Na+/H+交换体3 96T

Septin 11： 细胞分化蛋白SEPT11抗体 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照)

大鼠少突胶质前体细胞ROPC 大鼠S100钙结合蛋白A6(S100A6)ELISA试剂盒 OFQ/N(Human orphanin FQ/nociceptin)  人孤腓肽 96T

Six3： 晶状体发育相关蛋白Six3抗体 AGS(人胃腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2