HFF-1人皮肤成纤维细胞

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的产品：

MAP3K4： 原活化蛋白激酶激酶激酶4抗体 小鼠网织细胞肉瘤;M5076

INS-1(大鼠胰岛细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 脆弱拟杆菌 大鼠盐皮质激素受体(MR)ELISA试剂盒 Mouse Cluster of differentiation 3,CD3  小鼠CD3分子 96T

NEUROD6： 神经细胞分化因子6抗体 CM-H062人肾管状上皮细胞培养基100mL

IFNA13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 蛋白 (His 标签) 大鼠酰胺腺二核苷酸0酸(NADPH)ELISA试剂盒 GnRH  鱼类释放激素 96T

MEIS2： 同源盒蛋白Meis2抗体 COLGALT2 Others Human 人 GLT25D2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

HOXC4： 同源盒蛋白C4抗体 人滋养层绒毛细胞cDNAHVT cDNA

TT(人甲状腺导管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 人8(KLK 8)ELISA 试剂盒 CC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉细胞蛋白(Clara细胞分泌蛋白)抗原 0.5mg

HOXD13： 同源盒蛋白D13抗体 HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Victoria/210/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照)

C57BL/6小鼠胚胎干细胞 C57BL/6 mouse embryonic stem cells 人6(KLK 6)ELISA 试剂盒 CCR-2/5(CC chemokine receptor 2/5) CC趋化因子受体2/5抗原 0.5mg

Histone H1.4： 组蛋白H1.4样蛋白抗体 猪肾细胞;LLC-PK1 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞，NK-92细胞 P615细胞，615小鼠状肺腺癌瘤株

HFF-1人皮肤成纤维细胞小鼠海马趾星形胶质细胞(MA-h)(5×105) kasumi-1, 人白血病细胞株 Human 大鼠骨粘连蛋白(ON)ELISA 试剂盒 Beta2-GP1 Ab IgA(Human Beta2-Glycoprotein 1 antibody IgA)  人β2糖蛋白1抗体 平滑肌细胞培养基SMCM-prf

HGF Protein Mouse 重组小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 (His 标签) 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒 ANG-R-Tie1  大鼠血管生成素受体Tie1 96T

protein C： 依赖的蛋白C重链抗体 PROC Others Mouse 小鼠 PROC1 / Protein C / PROC 人细胞裂解液 (阳性对照)

KYSE450 食管癌 大鼠骨形成蛋白6(BMP6)ELISA试剂盒 Tie-2  大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪酸激酶2 96T

Plexin A1： 神经丛蛋白A1抗体 TOV-112D细胞，人上皮性卵巢癌细胞 人肾小管近段上皮细胞,HK-2细胞 子宫内膜上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

三、培养注意事项 

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。