HCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、培养注意事项 

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。

公司正在出售的产品：

MTHFR： 亚甲基四氢还原酶MTHFR抗体 CM-R022大鼠甲状腺上皮细胞培养基100mL

IFNA8 Protein Human 重组人 Ierferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 标签) 大鼠胰α2A(AMY2A)ELISA试剂盒 HSV- I IgM 单疱疹Ⅰ型病毒 IgM(捕获法二步法)

MEK1： MEK1/MAPKK1抗体 PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin / PDPN 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

大鼠主动脉内皮细胞培养基 100mL 大鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒 HSV- II IgG 单疱疹Ⅱ型病毒 IgG(间接法二步法)

MTNR1B： 褪黑素受体1B抗体 Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 牛肾细胞,MDBK细胞 Hs 578Bst(人成纤维细胞)

HCA57： 肝癌相关抗原57抗体 CL-0381MDA-MB-175VII(人导管癌细胞)5×106cells/瓶×2

BE(2)C细胞，人神经母细胞瘤细胞 乙型溶血性链球菌 人胚肝二倍体细胞;CCC-HEL-1 人巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2/CXCL-2)ELISA 试剂盒 PSD-95 突触后密度蛋白95(抗原) 0.5mg

Complement C3： 补体C3抗体 HA Others H11N2 甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照)

人慢性髓系白血病细胞;K562 人巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA 试剂盒 BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2) 癌易感基因2抗原 0.5mg

H1N1 Hemagglutinin 2： 甲型流感病毒血凝素抗体 人胚肺二倍体细胞;HEL-2

HCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞小鼠脑膜细胞(MMC)(5×105) CNE1, 人鼻咽癌细胞系 Human 大鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA 试剂盒 apo-B100(Mouse apoprotein B100)  小鼠载脂蛋白B100 96T

PKC mu： 蛋白激酶C mu型抗体 溶液P/S

VEGFA Protein Human 重组人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋白 大鼠核转录因子κBP65(NFκBp65)ELISA试剂盒 ATMA/TMAB(Human Anti-Thyroid Microsome Antibody)  人抗甲状腺微粒体抗体 DPP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 DPP4 / DPPIV / CD26 人细胞裂解液 (阳性对照)

J82 人膀胱移行细胞癌 大鼠核转录因子κB(NFκB)ELISA试剂盒 25(OH)D3/25 HVD3(Mouse 25-Dihydroxy vitamin D3)  小鼠25羟基维生3 96T

Pepsinogen II： 原C抗体 Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]细胞，人肝癌细胞 人胚肾细胞(亚系克隆),FIP293细胞 胎儿表皮角化细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)