酶ELISA试剂盒，即酶联免疫吸附试验试剂盒，是酶免疫测定技术中应用广的技术。其基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，这种结合既不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可以与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。在加入底物溶液后，底物在酶的作用下会使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，从而出现颜色反应。因此，可以通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。

　　酶ELISA试剂盒在使用前的准备是确保实验准确性和可重复性的关键步骤。以下是系统化的准备流程及注意事项：

　　一、试剂与材料准备

　　试剂平衡与分装

　　温度平衡：

　　未开封的试剂盒需提前从冰箱（2-8℃）或冷冻（-20℃）中取出，室温（20-25℃）平衡30分钟，避免温差导致冷凝水稀释试剂。

　　分装处理：

　　若试剂需多次使用，建议分装成单次用量（如标准品、酶标抗体），避免反复冻融导致失活。

　　试剂检查

　　外观确认：检查液体试剂是否浑浊、沉淀或变色（如TMB底物变蓝可能已氧化失效）。

　　有效期验证：确保试剂在保质期内，开封后未过期（如部分试剂开封后稳定性仅1个月）。

　　标准品配制

　　梯度稀释：根据说明书用样本稀释液（如PBS或专用缓冲液）将标准品稀释成系列浓度（如1:2递进稀释），用于制作标准曲线。

　　混匀操作：使用涡旋仪轻轻混匀，避免产生气泡，影响准确性。

　　二、实验器材准备

　　耗材预处理

　　酶标板：

　　检查板条是否变形或受潮，开封后未使用的板条需密封并加干燥剂保存。

　　如需自备板条，选择高结合力ELISA板（如平底96孔板），避免使用含去垢剂的板子。

　　吸头与容器：使用无酶、无内毒素的离心管及一次性吸头，避免交叉污染。

　　仪器校准

　　移液器校准：确保移液精度（如使用0.1-10μL、20-200μL量程），定期校准。

　　洗板机设置：调整洗板次数（通常5次）、浸泡时间（30秒）及吸液速度，避免残留或冲掉结合抗体。

　　三、样本处理

　　样本采集与保存

　　血清/血浆：收集后尽快离心（3000 rpm，10分钟），分装后-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

　　细胞上清：离心去除杂质（如细胞碎片），直接用于检测或暂存于2-8℃（24小时内使用）。

　　样本稀释

　　用试剂盒提供的稀释液（或PBS）将样本稀释至合适倍数，避免基质效应干扰（如血清稀释10倍可减少非特异性结合）。