2XRAPA HiFi PCR Mix

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

商品属性

 RAPA HiFi DNA 聚合酶，其来源于高保真 DNA 聚合 酶，并加入了增强的延伸结构，使其具有超保真性能（~280 倍 Taq）、长片段扩增能力、高产量。长片段扩增能力，使用 该酶可轻松扩增 8kb 的基因组 DNA、20kb 的λDNA、8kb 的 cDNA。该酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、强 3’-5’的外切酶活性，产物为平末 端。

特点和用途
(1) 超保真扩增：~280 倍 Taq 的保真性能，是载体构建、点突变、NGS 模板扩增、基因合成的用酶。
(2) 快速扩增：具有 6kb/min 的扩增能力。
(3) 长片段扩增：质粒、λDNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb，基因组可以有效扩增>8 kb，cDNA 可以有效扩增>8kb。
储存：长期储存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 个月）保存。
使用方法
1. 按下表配制反应体系并混合均匀：
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
模板 DNA 1-250 ng
ddH2O up to 25 μl
*模板 DNA 用量参数(25 μl 反应体系)
5-250 ng Genomic DNA
 0.1-10 ng Plasmid DNA
 1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 扩增循环参数
（1）扩增片段<5kb 时采用如下程序
循环数 温度 时间
1
st Cycle 95°C 1min
25-35 Cycles
95°C 30s
50~60°C 30s
72°C 6kb/min
Last Cycle 72°C 2min
（2）扩增片段>5kb 时采用如下程序
循环数 温度 时间
1st Cycle 92°C 1min
25-35 Cycles
92°C 10s
50~60°C 30s
72°C 2-3kb/min
Last Cycle 72°C 2min
3. 电泳：1% 琼脂糖凝胶电泳，上样 5 μl，电泳结束在紫外灯下检测条带。
4. 注意事项：（1）当模板 GC 含量>65%时，请添加5× Q-Solution（Cat. No.: A3002）。（2）当扩增片段<1kb 时，延伸时间可直接使用 15s，当扩增片段>5kb 时，按照2-3kb/min 的延伸时间进行设置，能获得更高的产量。（3）由于不同的 PCR 管其导热性能有所不同，通常 PCR 采用25μl 体系可以获得更高的产量。

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