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RAPA3G SYBR Green qPCR Mix

更新时间:2023-11-09

简要描述:

RAPA3G SYBR Green qPCR Mix储存:请避光置于-20℃以下可保存3年。该试剂经 30 次冻融后性能无下降,因此不使用时请置于-20℃避光保存。

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公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

商品属性

货号

产品名称

规格

P-PR1262

RAPA3G SYBR Green qPCR Mix

1ml

P-PR1262

RAPA3G SYBR Green qPCR Mix

5ml

本制品是采用 SYBR Green 嵌 合 荧 光 法 进 行Real-Time PCR 的专用试剂,本 SYBR Green qPCR Mix将化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP、SYBR Green 染料等试剂预混在一起,是一种 2×浓度的单组分预混试剂。该制品配有单独的 ROX 内参染料,可用于需要 ROX 进行孔间校正的定量 PCR 仪。RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶,其具有最高的杂质耐受性(对乙醇、胍盐、肝素具有高的耐受性),因此对于纯度较差的 DNA 模板,该 Mix 仍然可以获得理想的实验结果。RAPA3G DNA 聚合酶为化学法修饰的 HotStart版本,其在 50℃以下 100%无活性,只有 95℃条件下加热5min 后才能恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性 PCR 扩增,极大的提高了 PCR 扩增特异性。该试剂盒的反应缓冲液,可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
包装
规 格
2×RAPA3G SYBR
Green qPCR Mix
50×ROX Dye
1ml (A2250A) 1 ml 200 μl
5ml (A2250B) 1 ml×5 200 μl
储存:
请避光置于-20℃以下可保存3年。该试剂经 30 次冻融后性能无下降,因此不使用时请置于-20℃避光保存。
操作方法
1. 根据机型选择步骤 A 或 B
A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-TimePCR 仪,包括:ABI PRISM7900HT, 7300/7500/7500 FastReal-Time PCR (Applied Biosystems);Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系:终浓度
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意:引物用量有时可提高到 0.8 μl 以提高扩增效率。B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-TimePCR 仪,包括:LightCycler (Roche Diagnostics); CFX96Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ);Line-Gene等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系:终浓度
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法,程序如下:
 Stage 1: 95℃ 5min*
 Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles
 Stage 3: Dissociation analysis
注意:由于该酶为化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶,必须于 95℃加热 5min 才能恢复酶的活性,该热启动步骤不能缩短时间。
3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。

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