双孢蘑菇（白蘑菇、洋蘑菇）说明书

双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)说明书培养温度：  35-37℃　英文名称：Double spore mushroom (Bai Mogu, Yang mushroom)　培养保藏法:培养后于4—6℃冰箱内保存。

实验内容：
1. 双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)说明书称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 
2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 
3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 
4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

保存方法：
 双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)说明书低温存法
①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法保存。
脱水存法
①沙土保存法，能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。
② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。
③ 石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。
基本概念：
(1)  双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)说明书菌群：由多种细菌混合组成的相对稳定的细菌群体，具有某些共同性状。如大肠菌群包括大肠杆菌、产气肠细菌及他们之间的过渡类型。
(2) 菌属：菌种的上一级分类，通常性状相近、亲缘关系密切的若干菌种组成一个菌属，如芽孢杆菌属、葡萄球菌属、乳杆菌属等。
(3)是细菌基本的分类单位，通常指表型特征相似、亲缘关系接近的一类细菌群体，与同属内其他种有着明显差异；当涉及到细菌保存时，菌种是指细菌的种子（用来保存）资源。
(4) 菌型：同一菌种的不同细菌，在某些方面存在较小差异的为同一菌型，通常一个菌种内的细菌可以分为多种不同的菌型。
(5) 菌株：由一个独立分离的单细胞系培养而成的纯遗传型群体及其一切后代，一种微生物的每一个不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。

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