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ELISA试验测定所需试剂器材
  • 发布日期:2024-05-06      浏览次数:72
    •   ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。
       
        1. 试剂
       
        (1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克  加蒸馏水至1000ml
       
        (2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M KH2PO40.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸馏水至1000ml
       
        (3) 稀释液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。
       
        (4) 终止液(2MH2SO4):蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
       
        (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml 0.1M柠檬酸(19.2克/L)24.3ml 加蒸馏水50ml。
       
        (6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml底物缓冲液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl
       
        (7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5)1ml 3%H2O2 2μl
       
        (8) 抗原、抗体和酶标记抗体。
       
        (9) 正常人血清和阳性对照血清。
       
        2. 器材:
       
        (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。
       
        (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
       
        (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。
       
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