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ELISA实验中OD值偏低探讨
  • 发布日期:2024-05-13      浏览次数:55
    •   OD全称optical density,也就是光密度,也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质有的吸收光谱,来鉴别物质或者测定物质的含量,也就是将一束特定波长的光通过被检测物,被检测物可以将光吸收掉一部分,通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高,吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。
       
        OD值是用酶标仪测定的,其范围一般在0-3之间,也有高于3.0的,其值的大小跟孔中颜色的深浅成比例,一般颜色深,OD值就比较高,另外ELISA所测定的OD值反应的结果一般是一定稀释度的抗体效价,如果你所用的抗体稀释度很小,效价很高的话,其OD值是会很高的。
       
        实验中OD值偏低情况分析:
       
        第一种情况,整体的OD值偏低
       
        可能情况分析:
       
        1. 标准问题,标准浓度有没有提高的潜力,标准曲线的拟合方式等
       
        2. 显色试剂问题,显色试剂是否新鲜,是否污染
       
        3. 检测抗体,检测抗体效价是否OK,保存方法是否合适,稀释液中不含有蛋白质,基质中有影响酶活的物质等
       
        4. 体系中是否有其他影响抗原抗体结合的物质
       
        5. 孵育条件是否正确
       
        6. 洗涤不能过猛,洗涤过猛也可能会造成显色偏低
       
        第二种情况,标准曲线OK,样本的OD值很低
       
        情况概述:操作步骤全按照要求,样本信息也适用,样本类型血清,标曲OK,但就是样本的OD值很低,不在曲线范围内。
       
        可能情况分析:
       
        1. 一般标曲OK,试剂盒基本没有质量问题,这个时候先去分析样品和保存方法的原因。
       
        2. 样品是否新鲜,小爱之前看到很多论坛大咖建议用新鲜样品检测,将标准品稀释后加入血清或血浆中检测(也就是血清进一步稀释标准品),观察检测结果,判断是否是血清中有未知物质影响。
       
        3. 血清中成分复杂,标准蛋白的稀释液成分简单,血清中可能有450nm显色物质与板底非特异结合,或者有些非特异结合抗体的蛋白,不能洗干净,所以本底比标准样品稀释液高。
       
        4. 适当延长显色时间。
       
        5. 更换酶标仪,排除仪器原因。
       
        6. 联系我们,尝试其他方法。
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