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进口ELISA试剂盒步骤与方法
  • 发布日期:2020-09-02      浏览次数:208
    • 进口ELISA试剂盒使用方法:

      1、组织固定于10%的福尔马林中,常规脱水包埋。

      2、切片厚4μm,常规脱蜡至水。

      3、用配制好的Weigert氧化剂氧化5min。

      4、稍水洗。

      5、用Weigert漂白剂漂白1~2min。

      6、流水冲洗2min。

      7、95%的乙醇稍洗。

      8、切片入装有Weigert间苯二酚品红染色液的染色缸(加盖)中,室温下染色1~3h。

      9、用酸性分化液分化至无染液脱下,约2~3s。

      10、流水冲洗10min。

      11、VG染色液复染30s。

      12、急速用水洗一下,立刻用95%的乙醇快速分化和脱水。

      13、常规脱水透明,中性树胶封固。

      进口ELISA试剂盒操作步骤:

      1、标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后进口ELISA试剂盒在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为300ng/L,200ng/L,100ng/L,50ng/L,25ng/L)。

      2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。

      3、加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      4、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

      5、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

      6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满进口ELISA试剂盒洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      7、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

      8、温育:操作同3。

      9、洗涤:操作同5。

      10、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

      11、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      12、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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