Bst 4.0 Basic Mix (液体预混)

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

商品属性

该制品为单一组分的 MasterMix（2 倍浓度），包含了反应缓冲液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。Bst4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依赖于 RNA 模板的聚合酶活性（逆转录），还具有依赖于 DNA 的聚合酶活性，因此无论DNA 或 RNA 样本均可使用该制品进行高效的恒温扩增。该制品是进行 LAMP 及 RT-LAMP 扩增反应的试剂。优化的反应体系，确保快速的完成检测试剂的反应体系建立。该系列产品不包含任何其它辅助染料，在 LAMP 的扩增搭配 OG 橙绿变色管进行可视化变色反应。除此外，该制品还可以用于其它恒温扩增实验，包括 CPA、SMAP 等。
储存：长期保存制品于-20℃，保存 2 年。
使用实例（以 LAMP OG 橙绿变色为例）橙绿变色染料（OG Dye）以冻干的形式预加在 8 联管盖上。在 LAMP 反应完毕后（在反应完毕前，务
必不能将管盖上染料混入反应液中），将 0.2ml EP 管颠倒溶解 OG 染料后。LAMP 的反应产物将与 OG 染料形成强烈的绿色肉眼可见变色反应（阳性），而未发生扩增的 EP管为深橙色（阴性）。
（1）配制反应体系
在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂
2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl
*10xLAMP Primer Mix 2 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 20 μl
*10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM全部试剂加入完毕后，轻弹 EP 管底部后，再盖上 OG 橙绿变色管（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的 OG 染料溶解，OG 染料一旦混入反应液中将会终止 LAMP 反应）。
实验 LAMP Primer Mix 分别采用 1、1.5、2 μl，以阴性不变色，阳性样品正常变色为标准，作为后续测试用量。
（2）反应体系配好后，置于 60~68°C（实验采用65°C）进行反应 20~45min。（扩增良好的引物组合，通常 25min 即可变色，一般不超过 45min，实验设置20、25、30、45min）。
（3）观察结果：观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。将反应 EP 管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡 EP 管盖上的 OG 染料，静置 30s。再将 EP 反应管正置，并轻甩反应液到 EP 管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。
注意事项
1. 在用于其它恒温扩增反应时（如 CPA、SMAP 等），可参考如上策略进行使用，反应时间可能会需要调整。
2. 关于矿物油的使用，在配制完 LAMP 反应体系后，可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部，以减少气溶胶的污染。
3. 鉴于特殊的生产工艺， 全系恒温扩增 Mix 系
列均不能进行浊度分析。

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