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2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

更新时间:2024-12-06

简要描述:

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)储存:长期储存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置于 4°C(3 个月)保存。

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公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

商品属性

货号

产品名称

规格

P-PR1267

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

1ml

P-PR1267

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

10ml

产品介绍:

RAPA HiFi DNA 聚合酶,其来源于高保真 DNA 聚合 酶,并加入了增强的延伸结构,使其具有超保真性能(~280 倍 Taq)、长片段扩增能力、高产量。长片段扩增能力,使用 该酶可轻松扩增 8kb 的基因组 DNA、20kb 的λ DNA、8kb 的 cDNA。该酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、强 3’-5’的外切酶活性,产物为平末 端。该制品中已经含有溴酚蓝染料,PCR 扩增完毕后可直接 点样于琼脂糖凝胶,无需再加入 DNA Loading Buffer。

特点和用途
(1) 超保真扩增:~280 倍 Taq 的保真性能,是载体构建、点突变、NGS 模板扩增、基因合成的用酶。
(2) 快速扩增:具有 6kb/min 的扩增能力。
(3) 长片段扩增:质粒、λDNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb,基因组可以有效扩增>8 kb,cDNA 可以有效扩增>8kb。
储存:长期储存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置于 4°C(3 个月)保存。
使用方法
1. 按下表配制反应体系并混合均匀:
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
模板 DNA 1-250 ng
ddH2O up to 25 μl
*模板 DNA 用量参数(25 μl 反应体系)
5-250 ng Genomic DNA
0.1-10 ng Plasmid DNA
1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 扩增循环参数
(1)扩增片段<5kb 时采用如下程序
循环数 温度 时间
1st Cycle 95°C 1min
25-35 Cycles
95°C 30s
50~60°C 30s
72°C 6kb/min
Last Cycle 72°C 2min
(2)扩增片段>5kb 时采用如下程序
循环数 温度 时间
1st Cycle 92°C 1min
25-35 Cycles
92°C 30s
50~60°C 30s
72°C 2-3kb/min
Last Cycle 72°C 2min
3. 电泳:1% 琼脂糖凝胶电泳,上样 5 μl,电泳结束在紫外灯下检测条带。
4. 注意事项:(1)当模板 GC 含量>65%时,请添加
5× Q-Solution(Cat. No.: A3002)。(2)当扩增片段<1kb>5kb 时,按照2-3kb/min 的延伸时间进行设置,能获得更高的产量。(3)由于不同的 PCR 管其导热性能有所不同,通常 PCR 采用25μl 体系可以获得更高的产量。

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