内毒素ELISA检测试剂盒试验步骤：

　　1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

　　3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　6、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.

　　7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
 

　　内毒素ELISA检测试剂盒试验注意事项：

　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间一般控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

　　4．请每次测定的同时做标准曲线，一般做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6．底物请避光保存。

　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。