更新时间:2023-11-09
HiFi One-Step RT-PCR Mix(电泳)是一种不依赖于模板的 DNA 聚 合酶,催化脱氧核苷酸结合到 DNA 分子的 3’羟基端。
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
商品属性
货号 | 产品名称 | 规格 |
P-PR1273 | HiFi One-Step RT-PCR Mix(电泳) | 250T |
产品介绍:
末端转移酶(TdT)是一种不依赖于模板的 DNA 聚 合酶,催化脱氧核苷酸结合到 DNA 分子的 3’羟基端。带有 突出、凹陷或平滑末端的单双链 DNA 分子均可作为 TdT 的 底物,加尾长度可达 5~300nt。本酶经电子重构架技术筛选, 使其可以在 45°C 高温下反应,从而避免因 DNA 二级结构造 成的加尾效率下降。 该酶广泛用于 DNA 的 3’末端添加同聚物、利用修饰碱 基(如 ddNTP,DIGdUTP)标记 DNA 3’末端、TdT 介导的 dUTP 缺口末端标记技术(细胞凋亡的原位检测)等试验。
活性定义:37 ℃ 60 分钟内,催化 1nmol dNTP 加入到多聚核苷酸 3’羟基末端中所需的酶量定义为 1 个活性单位
热失活:75°C 20min。
储存:-20℃ 可保存 3 年。
注意事项
1、适量 EDTA 可使 Terminal Transferase 的活性丧失。
2、金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例子和磷酸根离子均对 Terminal Transferase 活性具有抑制作用。
3、DNA 末端 mol 数的计算,长度为 100bp 的 DNA:1pmol末端 DNA=0.33ng。
本试剂采用稳定高效的 RT-PCR 预混体系,是以 RNA 为模板进行一步法 RT-PCR 的专用试剂。其原理为用基因特 异性引物进行反转录反应,获得第一链 cDNA(不可使用 Oligo(dT)或 Random Rimer 合成第一链 cDNA),再使 用基因特异性正向引物和反向引物进行 PCR 扩增,在同一 反应体系中一步完成从反转录到 PCR 的全部过程。反应体 系中已含有电泳所需的指试剂(蓝色和黄色),反应后可以 直接进行电泳。 在本试剂盒中,将耐热 M-MLV 反转录酶、Rnase Inhibitor、 Hotstart 高 保 真 DNA 聚合酶以及稳定剂等配制成 50×One-Step Enzyme Mix 预混液;反应 Buffer、dNTP 以及 电泳指示染料配制成 5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer,因此 使得操作更加简单便,扩增产物可用于平端克隆和 DNA 测 序。
主要优势:
耐热M-MLV反转录酶可在55℃反应能更好的打开复杂二级结构,只需 10min 即可完成逆转录。
DNA 聚合酶为热启动型高保真酶,能够有效的抑制非特异性反应且具有较高的校正活性,酶激活仅需 2min。
具有宽泛的模板量兼容性,10 ng~1μg 都可有效扩增。
反应过程中无需开盖,避免了操作过程中的污染危害。
组分
名称 250T
50×One-Step Enzyme Mix 100 μl
5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer 1 ml
RNase Free H2O 1 ml×3
储存:请置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融。
注意:
1.50×One-Step Enzyme Mix 粘度高,第一次使用之前要离心收集至反应管底部,吸取时应缓慢小心。
2.由于使用了 Hotstart 高保真 DNA 聚合酶,反应配制可在常温进行,但各组分应-20°C 保存。
实验操作和反应条件:
1. 按以下组分配制反应液
RNA(病毒 DNA/RNA 样品直接使用 2~10μl) 10 ng~1 μg
5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer 4 μl
50×HiFi One-Step RT-PCR Enzyme Mix 0.4 μl
基因特异性上游引物(10μM) 0.8 μl
基因特异性下游引物(10μM) 0.8 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
注意:超过 1 μg 的 RNA 模板量会抑制 PCR 反应,建议第一次可使用 200 ng 的 RNA 模板,然后根据结果进行优化。
2. 在 PCR 仪上按以下条件进行 RT-PCR 反应:
55°C, 10min 逆转录反应
95°C, 2min 失活 M-MLV,并激活高保真聚合酶
95°C, 20s 30~40 cycles
TM°C, 20s
72°C ,
2Kb/min
72°C, 2min 末端延伸
3. PCR 反应结束后,可取 5 μl 产物直接进行电泳检测。预混液中已经包含绿色染料,无需再加入 DNA Loading Buffer。1% Agarose 电泳时,蓝色指示剂指示 3~5 kb,黄色指示剂指示<50 bp。
公司正在出售的产品:
Ub ELISA Kit | 猪轮状病毒通用RT-PCR试剂盒 |
E2 ELISA Kit | A Disintegrin And Metalloprotease 19,ADAM19 ELISA Kit |
Zinedin(ZIN)ELISA Kit | X-Box Binding Protein 1(XBP1)ELISA Kit |
5-hydroxyeicosatetraenoic acid,5-HETE ELISA Kit | 牛传染性胸膜肺炎PCR试剂盒 |
β ELISA Kit | 百部探针法PCR鉴定试剂盒 |
5'-3'Exoribonuclease 2(XRN2)ELISA Kit | 枪状肝吸虫PCR试剂盒 |
α-Fodrin ELISA Kit | 大巴贝虫PCR检测试剂盒 |
8-OHdG ELISA Kit | 禽肺病毒PCR检测试剂盒 |
FSH ELISA Kit | 猪托克特诺病毒PCR检测试剂盒 |
Zinedin(ZIN)ELISA Kit | 巴西副球孢子菌PCR试剂盒 |
ET-1 ELISA Kit | 巴西诺卡菌PCR检测试剂盒 |
zinc transporter 4,ZnT4 ELISA Kit | 猪水疱性口炎(VSV)核suan检测试剂盒 |
Ⅷ-Ag ELISA Kit | HiFi One-Step RT-PCR Mix(电泳)α2-PI 小鼠α2纤溶抑制物ELISA检测试剂盒 |
FSH ELISA Kit | 20S蛋白体(20SP)ELISA试剂盒 |
滋养层特异性糖蛋白(TPBG)ELISA试剂盒 | 26S PSM 大鼠26S蛋白体ELISA检测试剂盒 |