更新时间:2023-11-10
组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒保存条件:本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
商品属性
货号 | 产品名称 | 规格 |
P-PR1031 | 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒 | 100 次 |
P-PR1031 | 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒 | 100 次×2 |
保存条件:本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
产品介绍:
结合液/蛋白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组 DNA 在 高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的 步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲 液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1.重复性好:离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,长度可达 30kb -50kb,可直接用于 PCR,Southern-blot 和各种酶切反应。
注意事项:
1.结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。
3.结合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保批 pH 大于 7.5,pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20℃。 DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
自备试剂:无水乙醇、1xPBS 缓冲液、RNase A(10mg/ml)(RNase A(10 mg/ml) 有售)。
操作步骤:
提示:第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
如果需要去除 RNA,可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA(10mg/ml)溶液振荡 15sec,室温放置 5 min
1.组织培养细胞
a. 收集约 105-10
6悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管;对于贴壁细胞,应该先用胰蛋白消化后吹打下来收集。
b. 12,000rpm 离心 10 sec,使细胞沉淀下来。弃上清,留下细胞团和大约 10-20μl残留的液体。
c. 加 200μl 1×PBS 重悬洗涤细胞,12,000rpm 离心 10 sec,使细胞沉淀下来。弃上清, 将细胞沉淀重悬于 180μl 1XPBS 中。
d. 加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,充分混匀(可选步骤:为清除 RNA,加入 5µl RNase A(10mg/ml),振荡混匀,可选择室温放置 5min),再加入 200μl结合液 CB,立刻涡旋振荡充分混匀,在 70℃放置 10 min。
e. 冷却后入 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
f. 将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm 离心 1 min,倒掉收集管中的废液。
g. 按操作步骤 4 继续后续的实验。
2.动植物组织(例如鼠肝脑或者植物叶片)
a. 新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖切成小碎块(切成微块可以提高产量)后取 20-50mg,转入装有 180μl 组织裂解液 TL 的 1.5ml 离心管中, 用大口径枪头吹打混匀。
b. 加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。
c. 将裂解物放置在 55℃水浴 1-3 小时或者直到组织消化全,期间轻柔的振荡几次帮助裂解。为清除 RNA,加入 5µl RNase A(10mg/ml),振荡混匀(可选择室温放置 5 min)。
d. 加入 200μl 结合液 CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置 10 min。
e. 冷却后加入 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
f. 用 1ml 的枪头吸取混合物,将混合物加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm 离心 1 min,倒掉收集管中的废液。
g. 按操作步骤 4 继续后续的实验。
3.动物组织(鼠尾)
a.将 0.2-0.5cm 的鼠尾巴尖(即 20-50mg)剪碎(一定要剪 0-2cm 范围内的尾巴尖,否则裂解效果不好),或者在液氮中研磨组织成细粉后,转入装有 180μl 组织裂解液 TL 的 1.5ml 离心管中, 用大口径枪头吹打混匀。
b.加入 20μl 的蛋白酶 K(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。
c.将裂解物放置在 55℃水浴 3 小时或者直到组织消化全,期间轻柔的振荡几次帮助裂解。为清除 RNA,加入 5µl RNase A(10mg/ml),振荡混匀(可选择室温放置 5 min)。
d.用一个 1ml 不带针头的一次性输液抽打裂解物 2-3 次。
e.加入 200μl 结合液 CB 和 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。
f.12,000rpm 离心 5 min,将上清加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm 离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液。
g.按操作步骤 4 继续后续的实验。
4.加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 离心 30 sec,弃废液。
5.加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 sec,弃掉废液。
6.重复操作步骤 5。
7.将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分钟,以晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8. 取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 50-100 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好),室温放置 3-5 min,12,000rpm 离心 1 min。为了增加基因组 DNA的得率,将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000rpm 离心 1 min。(注意: DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA降解。)
公司正在出售的产品:
t-PA ELISA Kit | 紫河车探针法PCR鉴定试剂盒 |
fPSA ELISA Kit | 17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit |
β-Lg ELISA Kit | β Lactoglobulin,β-Lg ELISA Kit |
11-dehydro-thromboxane B2,11-DH-TXB2 ELISA Kit | 牛巴氏杆菌PCR试剂盒 |
MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit | 埃希氏菌属通用PCR试剂盒 |
11-Beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1(HSD11b1)ELISA Kit | 巴西副球孢子菌PCR试剂盒 |
β-site APP-Cleaving Enzyme 1,1BACE1 ELISA Kit | 腺病毒型PCR检测试剂盒 |
15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA Kit | 化脓放线菌PCR检测试剂盒 |
Methylase ELISA Kit | 转基因植物PRSV基因PCR检测试剂盒 |
β-Lg ELISA Kit | RT-6(RT-6)人疱疹病毒6型PCR试剂盒 |
cTn-Ⅰ ELISA Kit | HN荧光定量PCR检测试剂盒(不含反转录) |
β-EPR ELISA Kit | 转基因植物NPTII基因核suan检测试剂盒 |
17-Hydroxypregnenolone ELISA Kit | t-PA 小鼠组织型纤溶原激活剂ELISA检测试剂盒 |
Methylase ELISA Kit | 107kDa核孔蛋白(NUP107)ELISA试剂盒 |
组织蛋白去乙酰化(HD)ELISA试剂盒 | 11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA试剂盒 |