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这就是PCR鉴定试剂盒的使用方法
  • 发布日期:2023-02-27      浏览次数:250
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        PCR鉴定试剂盒原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
        PCR鉴定试剂盒的使用方法:
        一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
        1、标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
        2、用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。
        3、在7号管中加入5μL阳性对照(浓度为1×10E8拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
        4、换枪头,在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
        5、换枪头,在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
        6、重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
        二、样品DNA的制备
        7、用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
        8、如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
        三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
        9、如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照。
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