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ELISA包被的方式论述
  • 发布日期:2025-03-24      浏览次数:86
    •   ELISA(酶联免疫吸附试验)中的包被是将抗原或抗体固定到固相载体表面的关键步骤,通常使用聚苯乙烯微孔板作为载体。包被的方式包括直接包被和间接包被两种:
       
        直接包被:适用于天然蛋白和重组蛋白。将抗原或抗体溶液直接加入到微孔板中,通常在pH 9.0-9.6的碳酸盐缓冲液中,室温或4°C孵育过夜,以确保抗原或抗体充分吸附到载体表面。
       
        间接包被:用于小分子抗原或不稳定抗原。通过将小分子抗原偶联到载体蛋白如牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)上,形成较大的复合物后再进行包被,或采用间接捕获法,先用特异性抗体包被,再通过抗原与抗体的结合实现固相化。
       
        包被液的选择也很关键,常见的有pH 9.6的碳酸盐缓冲液和接近生理pH值的磷酸盐缓冲液。包被的温度一般在室温(18-25°C)或4°C进行,有时也可在37°C孵育2小时以加速反应。包被浓度通常为10ug/ml-20ug/ml,具体需根据载体和包被物的性质调整。包被完成后,为了封闭非特异性位点,防止后续步骤中的干扰,通常会使用牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉等封闭剂进行封闭处理。封闭剂的选择应根据实验的具体需求和背景噪声来确定。
       
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