ELISA试剂盒是一种用于检测生物样本中特定抗原或抗体的生物化学工具。其全称是酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）试剂盒。ELISA试剂盒通过利用抗原与抗体之间的特异性结合反应，结合酶催化底物显色，来实现对目标物质的定量或定性检测。

使用ELISA试剂盒时需要注意以下几个关键问题，以确保实验的准确性和可靠性：

1、严格遵循说明书

每个ELISA试剂盒都有详细的说明书，必须严格按照说明书的操作步骤进行，包括试剂的配制、加样、孵育、洗涤、显色和结果读取等。

2、试剂盒的选择

选择适合的ELISA试剂盒，考虑种属、样本类型、检测因子的浓度范围以及检测灵敏度和特异性。比较不同品牌和厂家的产品，考虑其技术资料、性能参数和用户评价。

3、试剂盒的保存与平衡

ELISA试剂盒应按照标签说明书储存，通常在2-8℃的温度下保存，以确保其稳定性和活性。对于长时间不使用的试剂盒，建议置于-20℃或更低的温度下保存，以延长其有效期。试剂盒从冷藏环境中取出后，应在室温平衡15-30分钟后方可使用，以确保试剂的稳定性和准确性。

4、样本处理

①.‌保存与预处理

避免反复冻融样本，分装后-80℃保存（短期可4℃）。

溶血/脂血样本需离心去除干扰物（如红细胞释放过氧化物酶）。

②.‌稀释与加样

样本稀释倍数需与说明书一致（如5倍稀释结果需×5换算）。

加样时枪头悬空至孔底，避免触碰孔壁导致交叉污染。

5、实验操作的规范性

加样与孵育：各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。在酶标板的相应孔中加入待检样本和对照样本，一般每孔加入100μL左右的样本或对照液，注意避免产生气泡。将酶标板放入孵育箱中，在37℃下孵育30分钟至1小时，以确保样本中的抗原与酶标板上的抗体以及标记抗体能够充分结合。‌

6、安全与废弃物处理

①.安全操作：底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

②.废弃物处理：所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

通过遵循上述注意事项，可以提高ELISA实验的准确性和可靠性，确保实验结果的有效性。