在做ELISA实验的时候,所采集的标本大多都需要溶解稀释后才能用来做实验。有的ELISA试剂盒里说明书上有写标本的溶解及稀释比例,这样您就可以直接通过比例进行稀释,但是有的说明书上并没有写稀释比例,那样您就只有自己去摸索找寻较为合适的溶解及稀释比例! 一、ELISA试剂盒溶解
(1)粉末规范品时间短离心,让因运送沾到管盖、管壁的规范品沉到管底。
(2)依据瓶标签参加必定体积的蒸馏水,加水后轻柔涡旋震动,室温静置溶解10-30分钟,让粉末*溶解。
留意:加水后暂不必移液枪吹吸,防止蛋白未溶解,枪头带出部分蛋白,待*溶解后可吹吸或涡旋振动混匀。
二、ELISA试剂盒规范品梯度稀释:
(1)耗材预备:预备8个1.5Ml离心管,写上S1-S7、空白。
(2)规范品稀释液的挑选:若血清、血浆、安排匀浆样本,用试剂盒中的规范品稀释液,梯度稀释规范品。若细胞上清样本,主张用细胞培养基梯度稀释规范品。
(3)梯度稀释:依据说明书,每管参加等体积的规范品稀释液(培养基)。汲取同体积溶解好的规范品到S1管中,吹打10次混匀,涡旋5S。从S1管中汲取同体积溶液到S2管,吹打10次混匀,涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。
(4)空白: ELISA试剂盒规范品稀释液(培养基)作为空白即零浓度。
留意:梯度稀释规范品时,涡旋震动混匀后可时间短离心,让到盖子、壁上的液体到管底,再开始稀释下个浓度。规范品溶解、梯度稀释是ELISA试验要害点,按以上办法梯度稀释就可!