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标本因素对ELISA试剂盒测定的影响
  • 发布日期:2019-12-21      浏览次数:132
    •    ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定,具有灵敏度高,操作简单等优点,但是在具体实验过程中影响因素较多,并且要按照严格的说明要求,在检验中除正常反应外,有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性结果)
        影响ELISA测定错误结果的原因主要包括3类:标本因素、试剂因素以及操作因素。
        其中标本因素对ELISA测定的影响做如下总结。

      ELISA试剂盒

        一、类风湿因子
        人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合,从而导致假阳性。
        解决办法
        1.用F(ab)2替代完整的IgG;
        2.标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效);
        3.检测抗原时,可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中,使RF降解。
        二、补体
        ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中,抗体分子发生变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连接起来,从而造成假阳性。
        解决办法
        1.用EDTA稀释标本;
        2.用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。
        三、嗜靶抗原的自身抗体
        抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。
        解决办法
        测定前需用理化方法将其解离后再测定。
        四、嗜异性抗体
        人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。
        解决办法
        可在标本稀释液中加入过量的动物Ig(s),但加入量不足或亚类不同时无效。
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