ELISA试剂盒洗刷在ELISA进程中虽不是一个反响过程,但却决议着试验的胜败。ELSIA试剂盒就是靠洗刷来达到别离游离的和结合的酶符号物的意图。经过洗刷以铲除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反响进程中非特异性地吸附于固相载体的搅扰物质。聚苯yi烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗刷时应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。可以说在ELISA操作中,洗刷是zui主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严厉按要求洗刷,不得大意。 ELISA试剂盒洗板方法:
1.手艺洗板办法:按试剂说明书严峻操作,稀释液用蒸馏水按1∶20稀释浓缩洗液,适量置于脸盆之中。从37℃水浴温箱中拿出温浴到时的反响板,到洗刷池处,铺开自来水约1min,然后快速甩掉反响液,即用自来水冲刷数次,甩掉水并用洁净的毛巾吸干,放入配好洗刷液的脸盆之中,浸泡5min~10min,然后将反响板取出,甩掉洗刷液,再用自来水冲刷数次,用洁净吸水的毛巾拍干(屡次)反响板。加显色剂a、b后,振动封板,放入37℃水浴温箱10min,取出,加间断液,振动,上酶标仪读板,查询作用。按感染性医疗废物处理洗刷池的液体及用过的洗刷液:参加健之素(500mg/片),使其浓度抵达2500mg/l,浸泡24h,搜集起来,交医疗废物处理公司处理。
洗板机法按试剂说明书严峻操作,稀释液用蒸馏水按1∶20稀释浓缩洗液,ELISA试剂盒适量置于洗板机洗液瓶里。将反响到时的反响板取出,用洗板机洗板5次,每次浸泡1min,取出,用洁净的毛巾拍干(屡次)反响板。加显色剂a、b后,振动封板,放入37℃水浴温箱10min,取出,加间断液,振动,上酶标仪读板,查询作用。
2.主动洗板:按试剂说明书严峻操作,稀释液用蒸馏水按1∶20稀释浓缩洗液,适量置于洗板机洗液瓶里。将反响到时的反响板取出,用洗板机洗板5次,每次浸泡1min,取出,用洁净的毛巾拍干(屡次)反响板。加显色剂a、b后,振动封板,放入37℃水浴温箱10min,取出,加间断液,振动,上酶标仪读板,查询作用。
ELISA试剂盒洗板时应注意以下问题:
(1)需每天校正注液量及残液量,洗涤后残液量不得大于2μl;
(2)及时更换破损吸液针,避免破坏底板包被;
(3)针对不同厂家酶标板注意调整吸液头下降高度,避免冲洗针头卡住酶标板;
(4)注意调整洗液量,洗液量过多将溢出,过少将达不到洗涤效果;
(5)关机前使用蒸馏水冲洗管道,避免洗液的结晶物堵塞管道;
(6)不同种试剂盒的洗液严禁混合使用。
ELISA试剂盒洗板可能碰到的问题有:
1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉;
2.采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差;
3.反应板过多造成洗板等待时间长。