激素ELISA检测试剂盒使用方法

一、样品 DNA 的制备

1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA提取试剂盒兼 容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本 试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分）。

二、引物的制备（在样品制备室进行）

2.按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物试管上

的标签），使得两条引物的浓度均为 10μM（10 pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL 足够 100 次 qPCR 反应。

三、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，

因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成 分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照， 只提供可以直接使用的长为 52bp 的 DN段作为阳性对照。

3.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

4.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。

5.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得

1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

8.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得

1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

9.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

激素ELISA检测试剂盒实验步骤

一、悬浮细胞的染色

将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5~1×106）用PBS洗2次，加入100 ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20 ug/ml）10 ul，室温避光30 min，再加入PI（50 ug/ml）5 ul，避光反应5 min后，加入400 ul Binding Buffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1 h）， 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。
 
二、贴壁培养的细胞染色

先用0.25%的消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。

三、 爬片细胞染色

同上，*后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。