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NHS活化磁珠

更新时间:2023-11-09

简要描述:

NHS活化磁珠是均匀的,表面覆盖有高密度NHS(N-羟基琥珀 酰亚胺) 官能团的磁珠。

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公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

商品属性

货号

产品名称

规格

P-PR1061

NHS活化磁珠

1ml30mg/ml

NHS-Activated Magnetic Beads 是均匀的,表面覆盖有高密度NHS(N-羟基琥珀 酰亚胺) 官能团的磁珠。磁珠通过形成稳定的酰胺键方式,快速、高效的共价结合任何含有伯胺的配 体(图 1)。本款磁珠可以在偶联条件下快速完成反应(室温 pH 6.5-9 下 15-30 分 钟,4℃ 下 4 小时),且不需要危险化学品。 NHS-activated Magnetic Beads 适于结合大分子蛋白。 Long-arm NHS-activated Magnetic Beads 被推荐用于结合小肽分子, 因为其长臂(21-原子) 的亲水连接基团可以减少位阻现象。 NHS-activated Magnetic Beads 可以地作为亲和树脂进行亲和纯化,将分子、 细胞和 部分细胞提取物进行提炼纯化。在与配体结合后,将磁珠添加到含有目标分子的样品中,然 后混合、孵育、洗涤和洗脱目标分子(图2)。

产品特点及优势:

·预活化即用型磁珠
·便于使用
·在pH7.4,4℃-25℃条件下可以快速偶联
·稳定的共价键,低水平的配体泄漏
·可重复使用的免疫亲和基质
·极低的非特异性结合率
·用途:用于纯化抗体,蛋白质/肽,DNA / RNA;细胞筛选、免疫沉淀
操作步骤

提示:
强烈建议在实验过程中进行滴定优化,以确定每个实验中应用的磁珠数量。该协议可以相应地放大和缩小。避免使用含有 tris 或其他含有伯胺类试剂的缓冲液,因为它们与预期的偶联反应竞争。
1.将适量的珠子转移到离心管中。将管放在磁力分离器上 1-3 分钟。当磁珠沉淀时, 去除上清液。 

2.取下试管,加入 5 倍磁珠溶液体积的 PBS 缓冲液,通过震荡重新悬浮磁珠,涡旋 30 秒。将试管至于室温环境 1-3 分钟,再将管放在磁力分离器上 1-3 分钟。当磁珠沉淀 时,去除上清液。 

3.重复步骤 2 两次。 

4.向含有目标蛋白质的粗样品中添加洗涤过的磁珠,并在室温或所需温度下温浴 1-2 小时 (温度越低,培养时间越长)。提示:强烈建议进行滴定实验以优化培养时间。因为孵化 的时间太长可能会导致很高的背景。 

5.用 5 倍磁珠体积的 PBS 缓冲液或 1M NaCl 清洗磁珠,直到 280nm 处洗脱液的吸 光度接近背景水平(OD 280<0.05)。提示:添加更高浓度的盐、非离子洗涤剂和还原剂也 可能会降低非特异性背景。例如,向洗涤缓冲液中添加 NaCl(浓度为 1-1.5 M)、0.1-0.5% 的非离子洗涤剂,如 TritonX-100 或 Tween-20,以及还原剂,如 DTT 或 TCEP(我们通 常使用 3mM)。 6.通过适当的方法,如低 pH(2-4)、高 pH(10-12)、高盐、高温、亲和洗脱或 SDS-PAGE 上样缓冲液中煮沸,洗脱目标蛋白。

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