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乳酸脱氢酶活性(WST-8法) 微量法说明书

更新时间:2025-09-02

简要描述:

乳酸脱氢酶活性(WST-8法) 微量法说明书测定的原理‌是通过检测LDH催化丙酮酸还原为乳酸的过程中NADH的生成量来间接测定LDH的活性。
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‌乳酸脱氢酶(LDH)活性微量法说明书测定的原理‌是通过检测LDH催化丙酮酸还原为乳酸的过程中NADH的生成量来间接测定LDH的活性。

具体过程如下:

‌反应原理‌:LDH的作用下,NAD+被还原生成NADHNADHWST-8相互作用产生颜色,从而进行比色测定(λmax=450 nm)‌。

‌反应条件‌:LDHNAD还原为NADHNADHWST-8相互作用产生颜色。这个反应在冰上避光进行,各组分(如Assay BufferLactateNADWST-8Enhancer)需在实验前从冰箱中取出并平衡至室温,整个过程需避光操作‌。

‌吸光度测量‌:450 nm波长下测量吸光度,吸光度与LDH活性成正比,可以通过比色法测定LDH的活性‌。

‌实验步骤和所需设备‌:

‌实验步骤‌:准备工作液(1×Assay BufferNADWST-8EnhancerLactate混合均匀),将工作液加入96孔板或微量玻璃比色皿中,加入待测样品,37℃恒温孵育一定时间后测量吸光度‌。

‌所需设备‌:酶标仪或可见分光光度计(能测450 nm处的吸光度)、恒温箱、制冰机、低温离心机、96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、去离子水、匀浆器(如果是组织样本)‌。

实验注意事项‌:

‌试剂保存‌:各组分(如Assay BufferLactateNADWST-8Enhancer)需在冰上避光保存,避免反复冻融‌。

‌操作注意事项‌:整个实验过程需在冰上避光进行,避免光照影响结果‌。

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