1、温育的温度：

育常采用的温度有43 、37℃、室温或4℃等。37℃是实验室中常用的温育温度，也是大多数抗原抗体结合的最适反应温度。抗原抗体反应一般在37℃经1～2 h 产物的生成可达ding峰，为加速反应，可在一定范围内提高反应的温度并在反应过程中连续振荡来增加抗原抗体接触的概率。抗原抗体反应在4℃更为彻di，形成的产物更多、更稳定，但因所需时间太长，在ELISA检测中一般不予采用。

2、温育的方式：

温育方式常采用温箱法、微波辐射法和水浴法。其中水浴法能较好解决因受热不均衡所致的周围孔与中央孔结果的吸光度差异（即“边缘效应"）。可将ELISA板置于水浴箱中，板底应贴着水面，使温度迅速平衡，为避免蒸发，可用塑料贴封纸覆盖板孔。若用温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料（如金属等），在盒底垫湿的纱布，最后将ELISA板放在湿纱布上。温育过程中每块反应板不能重叠放置，防止温度扩散的不均匀性。