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冷冻细胞活化操作步骤
  • 发布日期:2024-11-25      浏览次数:200
    • 细胞冷冻yell freexirig是保存微生物或动植物细胞株的常用方法。冷冻细胞到底该如何活化,一个不小心,细胞就受损了。冷冻细胞活化的正确操作步骤:

      1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。

      2. 细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。

      3.步骤:

      ①操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害。

      ②自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程,此时盖子易松掉。

      ③将新鲜培养基置于37 °C 水槽中回温,回温后喷以70 % 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。

      ④取出冷冻管,立即放入37 °C 水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化,以70%ethanol 擦拭保存管外部,移入无菌操作台内。

      ⑤取出0.9 ml 解冻之细胞悬浮液,缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10~1:15),混合均匀, 放入CO2 培养箱培养。另取0.1 ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。

      ⑥解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO 或glycerol),依细胞种类而异,一般而言,大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除,则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10 ml 培养基之离心管内,离心1,000 rpm, 5 分钟,移去上清液,加入新鲜培养基,混合均匀,放入CO2 培养箱培养。

      ⑦若不需立即去除冷冻保存剂,则在解冻培养后隔日更换培养基。


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