酶ELISA试剂盒，即酶联免疫吸附试验试剂盒，是酶免疫测定技术中应用广的技术。基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，这种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记的抗体可以与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。在加入底物溶液后，底物在酶的作用下发生颜色反应，其颜色深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。这种显色反应可以通过ELISA检测仪进行定量测定，从而将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来。
1、样本准备
样本收集：根据实验要求确定所需的样本量，并确保样本的完整性和代表性。例如，每个样本量收集体积=100ulx检测种类，如果需要复孔，则标本量收集体积=100ulx检测种类x2。
样本保存：样本收集后若在一周内进行检测可保存于2-8°C，若不及时检测，请进行分装，冻存于-20°或-80°C，避免反复冻融。
样本处理：血清样本取样时要注意避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响。
2、试剂准备
试剂平衡：ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用。
标准品制备：溶解标准品之前需短暂离心，彻d收集粉末；确保标准品完q溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液。
洗涤液配制：浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3、实验操作
加样准确性：各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
孵育和洗涤：孵育样品、检测抗体和显色底物均需要覆盖封板膜，减少污染和挥发，且每次使用后都要更换新的封板膜，防止交叉污染。振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。
终止反应：ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最合适的时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶反应系统中，当最高浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应。
4、质量控制
标准曲线：每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔最大孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时请乘以总稀释倍数。
数据读取：ELISA数据处理有专门的软件，并且要核对说明书选择合适的拟合曲线。
交叉污染防控：所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作；每次洗涤的步骤都要洗干净，如果是手动洗涤，每次拍板用的滤纸都要更换，防止交叉污染。
5、环境要求
温度控制：温度是ELISA结合反应的重要影响因素。实验前务必将所有试剂和检测样本平衡至室温，避免因温度差异导致ELISA检测结果不准确。
湿度管理：试剂盒应避免潮湿，过高湿度会使酶标板变形、变质，影响检测结果。要放在干燥、通风的地方。在使用试剂盒的过程中，也要注意保持操作环境的干燥。
