内毒素ELISA检测试剂盒是一种用于体外定量检测生物样本中内毒素（ET）浓度的工具，在科研和医学诊断领域应用广泛。该试剂盒多基于双抗体夹心法或竞争酶联免疫吸附试验技术。以双抗体夹心法为例，用纯化的内毒素抗体包被微孔板制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内毒素，再与HRP标记的内毒素抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻d洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的内毒素呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中内毒素浓度。

　　内毒素ELISA检测试剂盒在使用前准备:

　　（1）试剂平衡

　　未开封试剂：

　　从冰箱取出后，室温平衡30分钟（具体时间参考说明书），避免温差导致冷凝水影响反应。

　　已分装试剂：

　　若需冷冻保存（如-20℃），提前取出置于2-8℃缓慢解冻，避免直接常温解冻。

　　（2）器材准备

　　耗材要求：

　　使用无酶、无内毒素污染的耗材（如进口ELISA专用吸头、一次性EP管、96孔板等）。

　　枪头盒需灭菌处理，避免交叉污染。

　　仪器校准：

　　提前预热酶标仪（37℃），校准波长（通常450 nm或厂家指定波长）。

　　洗板机检查：确保吸液充分，残留液≤5μL/孔。

　　（3）标准品配制

　　梯度稀释：

　　按说明书用“标准品稀释液”逐级稀释（如1:2或1:10），混匀后立即使用。

　　示例：原液浓度100 EU/mL→50→25→12.5 EU/mL等。

　　注意事项：

　　每级稀释后轻轻拍打混匀，避免气泡产生。

　　最后一管作为空白对照（如PBS或专用稀释液）。