ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

 ELISA实验过程中时常发生重做的情况，实验是否需要重新进行，判断可以根据评估标准曲线、检测限、对照反应、重复性、交叉反应性、操作一致性和数据分析几个关键指标进行评估:
1、标准曲线的有效性:
 标准曲线应该呈现良好的线性关系, R2值通常应接近1。如果R2值远低于预期, 或者无法生成有效的标准曲线,这可能意味着实验存在问题。
2、检测限和定量限:
检测限和定量限应该符合试剂盒说明书的规定。如果实际检测的结果低于检测限,或者与预期值相差很大,这可能表明试剂盒的灵敏度不足。
3、阳性对照和阴性对照的反应:
阳性对照应该显示出明显的信号,而阴性对照的信号应该接近背景水平。如果阳性对照的信号过弱或阴性对照的信号过强,这可能是实验操作不当或试剂盒质问题的表现。
4、重复性和可重复性:
对同-样本进行多次检测,以评估试剂盒的重复性。如果结果之间的差异较大,这可能表明试剂盒的稳定性和可靠性受到了影响。
5、效反应性:
如果试剂盒对非目标分析物有非特异性结合,可能会导致假阳性结果。通过检测已知不含目标分析物的样本,可以评估试剂盒的交叉反应性。如果出现非特异性信号,可能需要 更换试剂盒或优化实验条件。
6、实验操作的一致性:
确保所有实验步骤按照标准化的操作流程进行,包括样本处理、试剂混合、孵育时间和温度等。任何操作上的偏差都可能影响实验结果。
7、数据分析的正确性:
使用适当的统计方法对数据进行分析,如t检验、ANOVA等,以确定实验结果的显著性和可靠性。
如果在以上任何一项评估中发现问题,可能需要重新进行ELISA实验。在重新实验之,应仔细检查所有实验步骤,并考虑可能的改进措施,如更换试剂盒、优化实验条件或改进样本处理方法。同时,记录所有的观察和测试结果,以便于未来的参考和追踪。