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ELISA试剂盒的检测方法步骤
  • 发布日期:2019-04-17      浏览次数:101
    •                                        ELISA试剂盒的检测方法步骤

      ELISA检测方法的zui新解析:一开始,试剂盒没有打开的时候,所有试剂都需要按照试剂瓶上面的标签所示来保存。值得在意的是,收到试剂盒后请尽快将标准品、孔板保存于-20℃。接着,我们再来看看具体的方法吧:
      第一  ELISA实验的类型
      抗原捕获是多种类型中的一个共同点。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。
      通常大家使用双抗夹心法进行ELISA实验,双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间,这种方法既灵敏又有效,受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是zui佳选择,例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着,又或者抗体只有一个抗体结合位点。在上述情况下,竞争性ELISA就更为适用,这种方法是采用带标记的纯化抗原与样本中无标记的抗原进行竞争,以结合捕获抗体。
      此外,我们还需要根据自身需要选择96孔板或是48孔板进行ELISA实验。
      第二、交叉反应
      如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自指定动物的抗体越来越容易,我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行ELISA检测时,检测用的二抗必须特异性针对检测一抗,而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合,实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗,来避免上述问题。
      第三、检测方式
      如今检测ELISA有许多途径,我们可以根据自己的偏好进行选择。一般ELISA检测的是酶促反应的可溶性产物,抗体上结合有相应的酶,而反应体系中添加有相应的底物。这种酶促反应生成具有特征性的颜色,可以通过分光光度计进行检测,碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上,也可以结合在二抗上,还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外ELISA的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。
      第四、提出的特别注意
      1. 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。
      2. 试剂盒中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。
      3. 自配的缓冲液应用pH计测量较正。
      4. 试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
      第五、ELISA试剂盒的评价角度思考
      1. 灵敏度:①为试剂检出被检物质的zui低量的能力;②为试剂对大量样品中阳性检出的能力。
      2. 特异性、精密度、准确度、简便性、安全性。
      3. 经济性:试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本,而市场价格比较合理;
      4. 试剂评价:需要有的确证方法和确证的样品进行检测。
      另外,ELISA试剂盒使用后,要将剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存哦!开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,注意避免潮湿。
       

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