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载脂蛋白ELISA检测试剂盒操作流程
  • 发布日期:2021-02-08      浏览次数:52
    • 载脂蛋白ELISA检测试剂盒操作流程如下:

      1待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。

      2酶标板置4℃,包被过夜。

      3洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后,即甩去,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

      4阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。

      5酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。

      6洗板,同4。

      7每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

      8酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。

      9洗板,同4。

      10每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。

      11每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。

      12分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差w1-w2,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

      13数据处理:在得出标本s和阴性对照n的 od值后,计算s/n值。s/n***2.1为阳性判定标准。

       

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