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进口ELISA试剂盒实验原理及步骤
  • 发布日期:2021-02-24      浏览次数:957
    • 进口ELISA试剂盒实验原理:

      本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)水平。用纯化的兔氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL),再与HRP标记的羊抗兔抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中兔氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)浓度。


      进口ELISA试剂盒性能:
       
      1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

      2.灵敏度:zui低检测浓度小于10 pg/ml。

      3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

      4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。


      进口ELISA试剂盒操作步骤:

      1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

      2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

      4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

      5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

      7. 温育:操作同3。

      8. 洗涤:操作同5。

      9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

      10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
       

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