Bst 4.0 SYBR Green Bead

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

商品属性

该制品为全体系冻干微球制品，内含恒温扩增所用的反应缓冲液、SYBR Green 荧光染料、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依赖于 RNA 模板的聚合酶活性（逆转录），还具有依赖于 DNA 的聚合酶活性，因此无论 DNA 或 RNA 样本均可使用该制品进行恒温扩增。该制品是进行 LAMP 及RT-LAMP 扩增反应的试剂。
SYBR Green 系列产品为实时荧光检测的专用试剂，可直接在恒温荧光仪或定量 PCR 以上进行 LAMP 反应扩增。
储存：-20℃保存 2 年；室温（25℃）保存>6 个月。
使用冻干微球进行全扩增体系用品的制备方法：将优化的扩增引物分装于 0.2 ml EP 管底部，于 70-80℃条件烘干1-2h。烘干后的 0.2 ml EP 管已经含有干燥的扩增引物，再加入一粒冻干微球即可制备成全扩增体系干燥品，该干燥品无需冷链运输，可长期保存。
反应体系说明：每一个冻干微球为按照 25 μl 反应体系建立，在使用时只需要加入 25 μl 的 ddH2O 或模板即可进行反应。
使用实例，进行 LAMP 荧光扩增
1. 配制荧光 LAMP 反应体系在 0.2 ml EP 反应管中加入下述试剂
Bst 4.0 SG Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到液体总量 25 μl
10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、LoopF/B 分别为 4-8 μM、F3/B3 分别为 2 μM。
2. 反应体系配好后，置于荧光定量 PCR 仪中于 65°C进行反应 15~30min。1min 收集一次荧光信号。读取扩增曲线进行阴性和阳性判读。
3. 根据荧光扩增曲线判读阳性和阴性。
注意事项：
（1）关于矿物油的使用，在配制完 LAMP 反应体系后，可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部，可以有效的减少气溶胶的污染。实验证明矿物油并不影响机器的荧光数值读取。
（2）关于扩增曲线的异常：由于 LAMP 扩增速度较快，荧光信号读取可能存在矫正计算问题，这与荧光设备的软件算法有管。在有些荧光 PCR 仪上，在相对荧光模式下，表现出曲线飞峰、终点曲线下降的问题。此时调整到原始荧光值模式下观察结果，或致电相应设备供应商进行咨询。

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