在大鼠ELISA实验中，终止液（通常为2mol/L H₂SO₄）的作用是通过强酸性环境破坏辣根过氧化物酶（HRP）的活性，从而立即停止TMB底物的显色反应。若漏加终止液，酶促反应将继续，蓝色会持续加深，吸光度（OD值）不断上升，严重影响定量准确性。
常见错误与注意事项：
不能跳过终止步骤：有文献指出部分ELISA可在不加终止液的情况下直接读数，但这需严格控制时间且波长不同（终止前~650nm，终止后~450nm），常规检测必须加终止液以稳定颜色并转换至标准波长。
洗板无法替代终止：洗涤只能去除游离成分，不能灭活已结合的HRP酶，反应仍会继续。
安全操作：补加时避免产生气泡，使用一次性吸头防止交叉污染。
漏加终止液的影响与补救策略
影响阶段 | 是否可补救 | 补救方法 |
刚发现漏加，显色仍在进行中 | ✅ 可补救 | 立即每孔加入50μl终止液，混匀后马上测定OD值（450nm） |
已超过推荐读数时间（如>15分钟），但颜色未明显褪去 | 部分有效 | 补加终止液后立即读数，并在结果分析时注明“延迟终止"，谨慎解读 |
显色已长时间未终止，TMB可能已降解或沉淀 | ❌ 难以补救 | 数据不可靠，建议重做实验 |
建议
立即行动：一旦发现漏加，应第一时间补加终止液并读数。
记录异常：在实验记录中标明“漏加终止液，于XX分钟后补加"，便于后续数据分析和复现实验。
预防为主：使用标准化操作流程（SOP）或排枪配合多通道移液器，减少人为失误。
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